Investigación sobre el efecto de Zhineng Qigong con el método de luminosidad de células de flujo sobre la síntesis de ADN y el ciclo celular de las células de cáncer de hígado - Instituto de Investigación de Ciencias Médicas Básicas de la Academia de Ciencias Médicas de China
Li Mei(1) Zhang Shifu(2) Wu Hong
Parque DongdanCentro de Instrucción de la Sucursal Zhineng Qigong de Beijing
Liu Jiahong(3) Li Fengchun
Abstract
Se usó el citómetro de flujo para analizar la síntesis de ADN y el ciclo celular en las células del cáncer de hígado humano (BEL-7402). El resultado del experimento demuestra que se inhibe el crecimiento celular en el grupo experimental. Las células se controlan y apilan en la fase de presíntesis (Etapa G1), lo que impide que las células entren en la etapa de síntesis de ADN (Etapa S), perturbando así la duplicación del ADN.
Palabras clave: Zhineng Qigong, método de luminosidad celular de flujo (FCM), síntesis de ADN, ciclo celular
Prefacio
Hemos demostrado en experimentos que Zhineng Qigong puede inhibir el crecimiento de sarcomas trasplantados en animales y la multiplicación de células cancerosas cultivadas fuera del cuerpo humano. Sin embargo, el mecanismo de la inhibición todavía necesita ser explorado. En el experimento reportado en este artículo, se adopta el método de luminosidad celular de flujo (FCM) en la investigación y el análisis del efecto de Zhineng Qigong en la síntesis de ADN y en el ciclo celular en la célula de cáncer de hígado con el fin de realizar una exploración preliminar de la función de Zhineng Qigong en la inhibición del cáncer.
Material y método
Cultivo de células:
Las células cancerosas utilizadas en este experimento son la línea celular (BEL-7402) de cáncer de hígado en el cuerpo humano establecida por Chen Ruiming, et al., en el Instituto de Biología Celular de Shanghai. Son células malignas similares al epitelio. Cultivamos las células en el medio de cultivo RPMI 1640 que contiene un 15 por ciento de suero sanguíneo de ternera. Se establecen grupos de experimento y grupos de control que se cultivan en dos incubadoras separadas. El grupo experimental recibe Qi transmitido por maestros de Qigong, de 3 a 5 minutos por cada transferencia. El grupo de control no es tratado mediante ningún proceso especial. El experimento se repite tres veces.
Coloración fluorescente del ADN y medición de FCM
Se hacen muestras de células cancerosas de acuerdo con el requisito técnico especial de esta medición. Después de la digestión con enzimas de ARN y con coloración fluorescente de yoduro de propidio (PI), medimos la intensidad de fluorescencia de PI de una célula individual a una velocidad de 1000 células por segundo, y cada muestra se mide en al menos 10 000 células, utilizando células de estimulación de fluorescencia divididas FACS 420. Clasificador (producto de Becton-Dicknson Company). El iluminador láser incluye un láser de iones de argón de 2 vatios, con una longitud de onda de 488 nm. La fluorescencia PI pasa a través de un filtro interrumpido de 585 nm. Se mide con un tubo fotomultiplicador y se analiza con un analizador de pulso de poligrama. Se muestran el diagrama de dispersión y el histograma del ADN de las células. Los datos obtenidos se ingresan en la computadora. Se lleva a cabo un análisis de ajuste de curvas según el programa de ajuste multinormal del software FACS 420 y calcular el contenido de ADN para obtener el porcentaje del ciclo celular (G1, S1, G2+M) y el coeficiente de variación (cv%) de G1.
Resultado
Las estadísticas obtenidas de la medición de FCM muestran que las células cancerosas en el grupo de control se encuentran en un estado de rápida multiplicación. El número de células en el período de síntesis de ADN (Etapa S) es mayor. Son respectivamente el 61%, el 64% y el 39% en los tres experimentos. El ciclo celular en el grupo experimental es del 35%, 40% y 27%. Sin embargo, el número de células en el grupo experimental en fase previa a la síntesis (Etapa G1) es de 2 a 3 veces mayor que el del grupo de control. Es del 35%, 40% y 48% en el grupo experimental, pero sólo del 10%, 19% y 18% en el grupo de control. Esto indica que el crecimiento de las células cancerosas en el grupo experimental se inhibe bajo el efecto del Qi externo, por lo tanto, la mayoría de las células se controlan en su crecimiento y se apilan en la Etapa G1, lo que impide que las células pasen suavemente a la Etapa S, lo que en consecuencia interfiere la síntesis de ADN.
También hemos estudiado la influencia del Qi externo en la curva de crecimiento de BEL-7402. El resultado muestra que la multiplicación celular en el grupo experimental está evidentemente inhibida. El experimento se realiza repetidamente dos veces con un resultado similar que concuerda con el resultado de la medición FCM.
Discusión
Sabemos que el ciclo celular se divide en cuatro etapas: 1) Desde que finaliza la mitosis hasta que se duplica el ADN, lo que se denomina Etapa G1; b) Etapa S cuando el ADN se está duplicando y el contenido de ADN es el doble que en la Etapa G1; c) Desde que finaliza la duplicación del ADN hasta el inicio de la mitosis, que se denomina Etapa G2. 4) Desde el inicio de la división celular hasta el final de la misma, como es la Etapa M. Cuando se analiza el ciclo celular, se adopta el método bioquímico en la medición del contenido promedio de ADN en la masa celular, el método de autógrafo con la incorporación de 3H-timidio es usado para medir el parámetro del ciclo celular, o se utiliza un citofotómetro estático para medir el contenido de ADN en un gran número de células y se dibuja un histograma de la distribución del contenido de ADN para analizar la célula. ciclo. Estos métodos no sólo consumen mucho tiempo y esfuerzo, sino que normalmente no pueden alcanzar el grado de precisión requerido en las estadísticas.
FCM es una técnica internacional moderna comparativamente nueva que puede medir de forma rápida y precisa el contenido de ADN en cada célula y puede calcular el cambio de transmigración del ciclo de generación celular. El resultado de nuestro experimento demuestra que el Qi externo provoca la agregación de células hepáticas BEL-7402 en la etapa G1 e impide que las células pasen suavemente a la etapa S, la etapa de síntesis de ADN cuando se duplica la sustancia genética. Debido a la interferencia del Qi externo, la síntesis de ADN se ve afectada y bloqueada. Este es uno de los mecanismos por los que el Qi externo inhibe el tumor.
Aunque este experimento es preliminar, proporciona una cierta base teórica para el mecanismo de inhibición del tumor de Zhineng Qigong.
Li Mei: investigador
Zhang Shifu: Investigador asistente
Liu Jiahong: Profesor